Электронный Парамагнитный резонанс в биологии

Метод непрерывного потока

На фиг. 33 изображена общая конструкция прибора для иссле­дований в непрерывном потоке, разработанная Пьеттом [5я Брэем [6] и др. Два исходных раствора находятся в шприцах, располо­женных в верхней части прибора; шприцы различаются ме. кду

Метод непрерывного потока

Фиг. 33. Конструкция прибора для измерений в непрерывном потоке.

— : идравличе( >,ий пресс, в — раствор фермента 3 — раствор субстрата й — и arpei "" ~*ная рубана а; 5 - шгриа для фермента (: 00 мл), 6 — шприц для субстрат» (10 'ил); 7 — смесительная камера; 8—прям! угольная ю арцевая. рубка ('1,5 мм х X 9 мм), 9 — резонатор;' 10 - приемный "щриц, 11 - чыпускное отверстие

Метод непрерывного потока

Фиг. 34. Спектры ЭПР, полученные методом непрерывного потока.

Б

А — образование радикала семихинона в присутствии пероксидазы. Во всех случаях через резонатор пропускались растворы 10-2 M гидрохинона и Ю-2 М H2Oz со скоро­стью 8 мл/с. 1 —пероксидаза отсутствует; II — пероксидаза в концентрации 4-10-8 M; III пероксидаза в концентрации 1 ■ Ю-8 М; В— кривая спада концентрации свобод­ных радикалов аскорбиновой кислоты [5]. Спектрометр настраивали на максимум погло­щения и затем прерывали поток реагентов, после чего можно было непосредственно зарегистрировать ход изменения концентрации радикалов во времени.

Смесительной камерой и резонатором, менять скорость движения поршней в сосудах, а следовательно, и скорость движения реак­ционной смеси по выходной трубке. При этом вдоль трубки будут создаваться динамические концентрации короткоживущих про­дуктов, причем концентрация парамагнитных промежуточных

Собой по площади поперечного сечения и емкости, так как реагенты должны смешиваться в неравных количествах. Поршни в обоих шприцах движутся вниз с одинаковой скоростью, что обеспечи­вает соблюдение требуемых пропорций при перемешивание раство­ров. В смесительной камере имеется большое число тончайших жиклеров, которые обеспечивают создание турбулентных потоков и быстрое перемешивание двух растворов сразу же после их поступления в камеру. Из камеры вниз идет кварцевая выходная ■рубка, проходящая через полость резонатора, расстояние кото­рого до смесительной камеры можно менять. Другая возможность г.< «стоит в том, чтобы, сохраняя фиксированным расстояние между

А

Продуктов будет величиной, постояипой для каждой данной точки выходной трубки, пока поршни будут двигаться внргз С одной и той же скоростью. Таким образом, для детектирования и воспроизведения такого сигнала можно использовать довольно большую постоянную времени и тем самым сильно повысить чув­ствительность. Быстрое изменение сигнала во времени перево­дится здесь в изменение по длине выходной трубки. Примеры спектров, полученных с помощью таких приборов, приведены на фиг. 34; можно видеть, что таким способом обнаруживаются достаточно малые концентрации парамагнитных центров, даже если эти центры принадлежат быстро изменяющимся нестацио­нарным продуктам.

Большой недостаток описанной системы состоит в том, что она требует больших количеств исследуемого материала. Если же экспериментатор располагает лишь относительно малыми коли­чествами (как это и бывает в большинстве случаев при биохими­ческих исследованиях), то необходимо модифицировать метод, таким образом, чтобы максимально использовать весь материал, проходящий через систему. Это можно сделать с помощью метода, описанного ниже.

Электронный Парамагнитный резонанс в биологии

Направление будущих исследовании

Описанные в этой главе исследования находятся еще на самой начальной, предварительной стадии, и о многих возможностях использования в биологии таких методов, как ДЭЯР и спин - метка, мы еще, конечно, …

Метод спин-меток

В разд. 7.1 уже упоминалось о том, что метод спин-меток был специально разработан для исследований биологических молекул. Этим он отличается от всех других методов ЭПР-спектроскопии, которые были разработаны ранее и …

Применение метода ДЭЯР

Вопрос о том, каким образом принцгп и. технику метода ДЭЯР,', описанные в разд. 3.8 и. 3.9, можно приложить к исследованию биохимических систем, лучше всего, по-видимому, рассмотреть на примере экспериментов с …

Как с нами связаться:

Украина:
г.Александрия
тел./факс +38 05235  77193 Бухгалтерия
+38 050 512 11 94 — гл. инженер-менеджер (продажи всего оборудования)

+38 050 457 13 30 — Рашид - продажи новинок
e-mail: msd@msd.com.ua
Схема проезда к производственному офису:
Схема проезда к МСД

Оперативная связь

Укажите свой телефон или адрес эл. почты — наш менеджер перезвонит Вам в удобное для Вас время.